استخراج و خالص سازی آنزیم تبدیل کننده آنژیوتنسین (ace) از ریه شتر (camelus dromedaries) و تعیین ویژگی های بیوشیمیایی آن

در این مطالعه آنزیم تبدیل کننده آنژیوتنسین (ace, ec 3.4.15.1) با استفاده از دترجنت غیر یونی تریتون x-100از بافت ریه شتر (camelus dromedaries) استخراج شد و در طی سه مرحله شامل: رسوب دهی با آمونیوم سولفات، کروماتوگرافی تبادل آنیونی باq-sepharose و ژل فیلتراسیون با sephacryl s-200 hr به میزان 314 برابر خالص گردید. فعالیت ویژه نهایی آن برابر unit/mg 74/45 بدست آمد. وزن مولکولی آنزیم با روش sds-page، تقریباً 189 کیلودالتون تخمین زده شد. برای سنجش فعالیت ace استخراج شده، از سوبسترای fapgg و یک روش اسپکتروفوتومتریک پیوسته استفاده شد. ace باعث تبدیل fapgg بهfa-phe و gly- gly می شود و در نتیجه جذب آن در 334 نانومتر کاهش می یابد. مقدار km و vmax آنزیم با استفاده از نمودار لینویور- برک به ترتیب mm 38/0 و mol min-1 mg-1µ 49/6 بدست آمد. مقادیر kcat و km/kcat آنزیم نیز به ترتیب min-1 104× 16/8 و m-1 min-1 107× 27/21 محاسبه گردید. حداکثر فعالیت آنزیم و پایداری آن در ph برابر 5/7 مشاهده شد. آنزیم به وسیله edta (mm 1) و فنانترولین (mm 5/2) به عنوان شلاته کننده یون های فلزی به طور کامل مهار شد. ace مهار شده توسط edta، در حضور فلزات دو ظرفیتی (با غلظت mm 1/0) به ترتیب mgcl2 > cocl2 > cacl2< zncl2 فعال گردید. فعالیت آنزیم توسط sds و tfe کاهش یافت در حالی که، تریتون x-100 اثر قابل توجهی بر فعالیت آن نداشت. ترکیب کپتوپریل به طور رقابتی آنزیم را مهار کرد و مقدار ki و ic50 آن به ترتیب 6/128 و 76/365 نانو مولار بدست آمد.